SC∕T 7223.2-2017 黏孢子虫病诊断规程 第2部分：吴李碘泡虫(水产)
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ID： |
075553891C144A3BA6B3AB15C1C05C35 |
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文件大小(MB)： |
0.35 |
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10 |
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日期： |
2021-12-23 |
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ICS 65.020.30,B 41,卡:才叫,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7223.2-2017,站于包子虫病诊断规程,第2 部分:吴李慎泡虫,Protocols for diagnosis of myxosporidiosisPart,2: Disease caused by Myxobolus wulii,2017 - 06 - 12 发布2017 - 10 - 01 实施,;②. 中华人民共和国农业部发布,SC/T 7223.2-2017,~‘,目。昌,SC/ T 7223 (( 黠抱子虫病诊断规程》拟分为如下部分:,第1 部分:洪湖腆泡虫;,第2 部分:吴李腆泡虫;,一一第3 部分:武汉单极虫;,一→第4 部分:吉陶单极虫,本部分为SC/ T 7223 的第2 部分,本部分按照GB/ T 1. 1二2009 给出的规则起草,请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任,本部分由农业部植业渔政管理局提出,本部分由全国水产标准化技术委员会CSAC/ TC 156) 归口,本部分起草单位:中国科学院水生生物研究所,本部分主要起草人:李文祥、王桂堂、邹红、熊凡、吴山功、李明,I,范围,本部分给出了饵(Ca rassius,李腆泡虫(Myxobolus wulii),病的综合判定,本部分适用于哪,2,下列文,件。凡是不注,GB/ T 6,SC/ T,3,3. 1 水:,3.2 乙醇:,3.3 Taq,3.4 dNTPs,3. 5 上游引,下游引,本对引,3.6 DNA mar,3. 7 其他试剂见,4 仪器和设备,、唱,4. 1 解剖盘、剪刀、慑子、解,4.2 体视显微镜和带测微标尺,4.3 盖玻片、载玻片和培养皿,4.4 电子天平,黠子包子虫病诊断规程,第2 部分:吴李破泡虫,4.5 普通台式离心机和高速冷冻离心机,4.6 普通冰箱,4. 7 微量移液器,4.8 PCR 扩增仪,4. 9 离心管和PCR 管,4. 10 紫外透射仪或凝胶成像系统,SC/T 7223. 2-2017,抱子虫病")的临床症状，规定了吴,的方法，以及吴李腆泡虫,1,SC/ T 7223. 2-2017,4. 11 水平电泳系统,5 感染对象与临床症状,5. 1 感染对象,吴李腆泡虫主要感染饵，还可感染链CHypophthalmichthys molitrix ) 和马口鱼CO户5αr时hthys bidens,) ,5.2 临床症状,吴李腆泡虫一般寄生于僻的姆和肝膜脏，寄生于肝膜脏的危害较大;患病的鱼厌食，昏睡，身体消,瘦，游动缓慢， 直至慢慢死亡;病鱼腹部膨大，肝膜脏显著增大，乳白色;鱼死亡后，肝膜脏溶解,6 吴李破泡虫的采集、固定与标本制作,6. 1 病鱼采集,观察待检鱼的临床症状和行为， 采集具有典型症状的鱼，采样方法、样品数量、样品封存和运输应符,合SC/ T 71 0 3 的规定,6.2 样晶的采集,剪开腹部，在肝膜脏中取出包囊团，或用吸管吸取服状物，置于培养皿中,6. 3 样品的固定,用1 0% 中性福尔马林溶液(见A.l)固定茹抱子虫包囊团或抱子，或用100% 乙醇保存,6.4 样品的标本制作,将妻自抱子虫样品置于载玻片上， 在标本中加一滴水，或者滴加少许吉姆萨溶液(见A. 2) ，盖上盖玻,片，用于显微镜观察,7 吴李确泡虫的鉴定,7. 1 吴李破泡虫形态学鉴定,根据显微镜内的测微标尺测量抱子和极囊的大小，吴李腆泡虫抱子的形态特征见附录B 。成熟抱,子壳面现为梨形，缝面观呈厚梭形，前端略尖，后端钝圆，无薄膜销，亮瓣底部有1 个~ 3 个" V"形榴皱;,抱子长16. 5 μm~ 1 8 . 9μm ，宽9.1μm~ 10. 8μm ，厚7 . 2μm~ 9 . 0 μm 。极囊2 个，呈梨形，几乎等大，极,囊长8 . 1μm~ 9. 9 μm ，宽3 . 4μm~ 4.0 μm ，约占抱子长度的1 / 2; 极丝盘成7 圈~ 9 圈,如果抱子的形态特征与上述描述相符，则可判定为疑似吴李腆泡虫,7. 2 吴李慎泡虫分子检测,7. 2. 1 虫体DNA 的提取,将用1 0 0 % 乙醇固定的抱子(有包囊的用清水冲洗，去除表面组织)充分干燥去除乙醇，置于1. 5 mL,的离心管中，加入0. 5 mL 裂解缓冲液(见A. 6) ， 55 0C 下过夜。冷却至室温后，加入500μLDNA 抽提缓,冲液(见A. 7) ， 摇匀， 5 200 g 离心10 min ，收集上清液。然后加人O. 1 倍体积的乙酸铀缓冲液(见A. 3),和2 倍上清液体积的一20 0C 预冷无水乙醇， 4 0C 下10000 g 离心10min 弃上清液，用7 0% 乙醇洗涤沉淀,2 次，弃上清液， 空气干燥后溶于4 0 μLTE 缓冲液(见A. 4 ) 中，一2 0 0C保存备用,7. 2.2 18S rDNA 的PCR 扩增,在50 μL 的PCR 反应体系中，包含模板基因组DNA 10 ng ~5 0 ng 、1. 5 U Taq 酶、1. 5 mmol/ L 的,MgClz 、0 . 2 mmo l/ L 的dNTPs 、上游引物和下游引物各2μmol/ L 、Taq 酶缓冲液5 μL 。无加热盖的,PCR 仪应滴加少许矿物油,在PCR 扩增仪中， 9 5 0C 预变性5 min ，再95 0C 50 s?56 0C 50 s?720C 1 min ，共35 个循环;最后,72 0C延伸1 0 min,SC/T 7223. 2-2017,PCR 扩增时，应设置阴性对……
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